一、histag纯化镍柱优缺点？
His-tag 作为蛋白纯化时的首选标签，其优势在于：
（1） N-端的 His-Tag 与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；
（2）采用 IMAC（固定化金属离子亲合层析）纯化 His-Tag 融合蛋白操作更加简便；
（3）His-Tag 对目的蛋白本身特性几乎没有影响，不会改变目的蛋白本身的可溶性和生物学功能；
（4）His-Tag非常小，一般不影响蛋白质的功能，且在融合蛋白结晶后对蛋白的结构没有影响；
（5）His-Tag 的免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫并制备抗体；
（6）与其它亲和标签构建成双亲和标签，并可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；His-Tag 融合蛋白的适用范围也较广，既可以在非离子型表面活性剂存在的条件下纯化，也可以在变性条件下进行纯化。前者通常用来纯化疏水性强的目的蛋白，而后者则通常纯化包涵体蛋白。
二、蛋白纯化后为什么要结晶呢?结晶目的是什么？
一个原因是分离，蛋白质的纯化与分离是离不开的，不分离怎么利用，而结晶其实也是分离的一个手段一部分第二个原因，低温结晶后蛋白质相对会稳定一点，酸碱高温都会破坏蛋白质，所以结晶后也便于保存以后再用。
三、His-taq纯化蛋白不挂柱子，可能的问题是什么？求高人指点？
有这么几个可能1、你western检测的到目标蛋白的标签吗？如果你的目标蛋白折叠的时候将你的HIS标签包裹进了蛋白内，HIS抗体是检测不到的。因此，即使你表达出来目标蛋白，没有标签怎样能挂上呢？
2、你的WASHBUFFER即洗杂蛋白的缓冲液的咪唑浓度过高，将目的蛋白冲洗了下去，待你洗脱的时候发现什么都没有挂上了。
四、his标签蛋白纯化原理？
His标签蛋白纯化原理：组氨酸（His）的残基上带有1个咪唑基团，可以和Ni2+、Co2+等过渡金属离子形成配位键而选择性的结合在金属离子上，这些金属离子能够用鳌合配体固定在层析介质上，因此带有His标签的蛋白在经过装配了金属离子的层析介质时可以选择性的结合在介质上，而其他的杂质蛋白则不能结合或仅能微弱结合。
结合在介质上的His标签蛋白可以通过提高缓冲液中的咪唑浓度进行竞争性洗脱，从而得到较高纯度的 His 标签蛋白。
五、His –taq是什么，怎么利用它纯化蛋白？
组氨酸标签,由六个连续的组氨酸构成. 组氨酸的咪唑基能与一些阳离子,如镍,可逆的结合,所以在加有his-tag的蛋白纯化时可以利用这个结合特性来分离纯化目的蛋白.