一、histag纯化镍柱优缺点？
His-tag 作为蛋白纯化时的首选标签，其优势在于：
（1） N-端的 His-Tag 与细菌的转录翻译机制兼容，有利于蛋白表达；
（2）采用 IMAC（固定化金属离子亲合层析）纯化 His-Tag 融合蛋白操作更加简便；
（3）His-Tag 对目的蛋白本身特性几乎没有影响，不会改变目的蛋白本身的可溶性和生物学功能；
（4）His-Tag非常小，一般不影响蛋白质的功能，且在融合蛋白结晶后对蛋白的结构没有影响；
（5）His-Tag 的免疫原性相对较低，可将纯化的蛋白直接注射入动物体内进行免疫并制备抗体；
（6）与其它亲和标签构建成双亲和标签，并可应用于多种表达系统，纯化的条件温和；His-Tag 融合蛋白的适用范围也较广，既可以在非离子型表面活性剂存在的条件下纯化，也可以在变性条件下进行纯化。前者通常用来纯化疏水性强的目的蛋白，而后者则通常纯化包涵体蛋白。
二、蛋白纯化的bindingbuffer和elutionbuffer能用多久？
蛋白纯化的binding buffer 和elution buffer一般是现配现用的，因为binding buffer 和elution buffer一般都是浓度比较低的溶液，长时间放置容易长菌污染，可以配置成高浓度的母液，在使用时稀释就可以了。
三、蛋白纯化原理及步骤？
蛋白纯化要利用不同蛋白间内在的相似性与差异，利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染，而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。每种蛋白间的大小、形状、电荷、疏水性、溶解度和生物学活性都会有差异，利用这些差异可将蛋白从混合物如大肠杆菌裂解物中提取出来得到重组蛋白。
蛋白的纯化大致分为粗分离阶段和精细纯化阶段二个阶段。一般蛋白纯化采用的方法为树脂法。粗分离阶段主要将目的蛋白和其他细胞成分如DNA、RNA等分开，由于此时样本体积大、成分杂，要求所用的树脂高容量、高流速、颗粒大、粒径分布宽．并可以迅速将蛋白与污染物分开，必要时可加入相应的保护剂（例如蛋白酶抑制剂），防止目的蛋白被降解。
四、蛋白质柱纯化过程中用的主要仪器有哪些？
柱纯化是蛋白纯化最高效的方法。
首先我们需要一个带有特定标签的柱子，也可能是阴离子柱，阳离子柱或者层析柱。
然后要一台纯化仪，我们实验室的是bio-red，其实最好的纯化仪是AKTA的，很耐折腾，bio-red的太敏感，大量纯化是容易出问题。
其他的仪器就是纯化后工作，比如纯化好的蛋白保存，可能会用到冷冻干燥。
对了，还有一个，就是SDS-PAGE蛋白电泳仪，用来检测蛋白是否表达，是否完全破碎，纯化后是否有杂蛋白等等。
其他的就没有了。。
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五、蛋白质的纯化方法有那些呢?具体步骤是什么？
蛋白质分离纯化常用方法有：
1、沉淀，
2、电泳：蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。
3、透析：利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法。
4、层析： a.离子交换层析，利用蛋白质的两性游离性质，在某一特定PH时，各蛋白质的电荷量及性质不同，故可以通过离子交换层析得以分离。如阴离子交换层析，含负电量小的蛋白质首先被洗脱下来。 b.分子筛，又称凝胶过滤。小分子蛋白质进入孔内，滞留时间长，大分子蛋白质不能时入孔内而径直流出。
5、超速离心：既可以用来分离纯化蛋白质也可以用作测定蛋白质的分子量。不同蛋白质其密度与形态各不相同而分开。