pcr需要引物酶吗？

一、pcr需要引物酶吗？

引物是PCR特异性反应的关键，PCR产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。引物设计有3条基本原则：首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发DNA聚合反应（即错配）。

二、pcr数据怎么处理？

数据处理如下

（1）扩增曲线：扩增曲线有两种展现形式，一种是线性，一种是对数形式。我们通常是用CT 来推算样品中样品的浓度。CT 值越高说明模板浓度越低。上面也详细说明了原理，在这里就不过多赘述。

（2）标准曲线：将已知浓度的样品（标准品）经过梯度稀释后分别取样进行荧光定量PCR，得到的一系列的Ct值，用这个Ct值与Log模板数对应可以得到一个相关的曲线，我们叫标准曲线。可以用这个标准曲线中的一些参数来判断这个荧光定量PCR体系的优劣。

（3）熔解曲线：Tm值，Melting Temperature（解链温度），PCR双链产物的退火温度。这两个图是在荧光定量PCR结束后，对产物进行逐步升温时进行的监测，可以看到在达到其解链温度时，荧光信号会有一个忽然的下降。我们将测得的这个曲线叫做熔解曲线。理论上如果PCR得到特异性产物则只有一个Tm值，在溶解曲线上表示只有单峰存在。如果是多相峰，那么可以判断产物不是单一的，发生了非特异扩增

三、pcr技术需要引物酶吗？

PCR反应中有两条引物，即5′端引物和3′引物。设计引物时以一条DNA单链为基准（常以信息链为基准），5′端引物与位于待扩增片段5′端上游的一小段DNA序列相同；3′端引物与位于待扩增片段3′端的一小段DNA序列互补。

DNA的复制需要RNA引物，这是由DNA聚合酶和RNA聚合酶的特性决定的。DNA聚合酶不能从头合成DNA（需要引物DNA or RNA），因为DNA聚合酶具有高保真系统，这个系统要求，在新链的延伸过程中，只有新添加的碱基与模板链形成双螺旋才能继续链的延伸，否则延伸终止，启动切除修复机制，直至添加正确的碱基，也即是在DNA聚合酶的上游位置一定要互补形成双链（可以是RNA-DNA）才能继续下游DNA的合成，这是它的忠实性和高保真系统决定的

四、pcr技术温度处理目的？

PCR技术温度处理的目的是变性和复性。

五、pcr前处理室温要求？

控温25度，我觉得控湿也很关键，湿度太大的时候经常会污染

六、pcr体系加完需要震荡离心吗？

必须震荡离心。因为加完pcr体系之后，管中的样品是一个不均一的状态，必须通过震荡使其混匀。才能够保证反应的均一。由于震荡后，溶液会黏在管壁上，所以必须离心。

七、rna电泳需要上pcr机吗？

需要。

PCR扩增仪又称为PCR基因扩增仪、PCR核酸扩增仪、聚合酶链反应核酸扩增仪，是利用PCR(聚合酶链反应)技术对特定DNA扩增的一种仪器设备。

PCR(聚合酶链式反应）是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备，能在变性温度，复性温度，延伸温度之间很好地进行控制。

八、pcr之前需要混匀离心吗？

必须混匀，离心。因为Pcr样品加入离心管中，它并不是一个均一的成分，所以必须震荡混匀。使其成为军医的成分。由于混匀时会将溶液粘在管壁上。所以需要离心使其全部沉入管底。

九、pcr荧光定量染料需要避光吗？

负20℃ 避光长期储存，避免反复冻融，使用前充分混匀，但要避免产生气泡。部分试剂解冻后可能出现絮状物质，4℃ 放置并上下颠倒混匀至溶液澄清，不影响试剂性能。

请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头，避免交叉污染和气溶胶污染。

② 推荐 10μL（q225、NOVO Max100）、20μL、50μL 体系；将引物和 qPCR Mix  混合配成大体系，混合均匀，为避免误差，可多配制1-2个加样孔的量，保证体系稳定性。

③ 通常引物终浓度为 0.2μM，也可以根据情况在 0.1-1.0μM 之间进行调整。

十、pcr技术引物需要互补配对吗？

这个问题问得非常不清楚，回答比较啰嗦。

首先，pcr技术的引物必须与需要扩增的模板DNA区域两端高度互补配对，否则就不能保证能准确识别和扩增特意DNA片段。

其次，引物不必完全与模板DNA两端完全一致完全互补配对，只需要保证引物3端15bp左右碱基互补配对即可，而5端可以不配对。

最后，如果模板是环状DNA如质粒，如果引物之间完全互补配对且与模板也是互补配对，则扩增的是整个DNA模板分子。这常常用于定点突变。